PAD4 抑制剂筛选检测试剂盒（氨法）高通量 PAD4 酶活荧光筛选科研试剂盒

名称:PAD4 Inhibitor Screening Assay Kit (Ammonia) 

品牌: Medlife

纯度:  N/A

货号:PC22449

规格:96 wells/价格:￥9095.00

链接:https://www.med-life.cn/product/1297423.html

一、产品简介

PAD4 Inhibitor Screening Assay Kit (Ammonia)，PAD4 抑制剂筛选检测试剂盒（氨），是用于人肽基精氨酸脱亚胺酶 4（PAD4）小分子抑制剂体外高通量筛选的荧光检测试剂盒Bertin Bio...。试剂盒包含重组人 PAD4 酶、底物 BAEE（N?α?苯甲酰?L?精氨酸乙酯）、检测试剂、 assay 缓冲液、阳性对照抑制剂等全套组分；底物 BAEE 为非天然底物，动力学特征与 PAD4 天然底物接近；整套试剂经过酶活标定、荧光背景质控，适配 96 孔 / 384 孔黑色荧光酶标板。检测原理基于 PAD4 催化底物发生脱亚氨反应释放氨，氨与试剂盒检测试剂反应生成荧光产物；采用酶标仪读取荧光信号，激发波长 405?415?nm，发射波长 470?480?nm，荧光信号强弱与 PAD4 酶活性正相关，可计算待测化合物对 PAD4 的抑制率、IC??数值。本试剂盒适合作为正交验证实验，排除其他检测体系的假阳性结果。试剂盒组分需?20℃避光分装保存，避免反复冻融；酶组分冰上操作，保障酶活稳定。本品仅用于体外生化科研实验，不可用于临床诊断、人体给药。

二、作用机制

PAD4 酶催化脱亚氨机制：重组人 PAD4 在钙离子辅助条件下，催化底物 BAEE 发生脱亚氨反应，底物精氨酸基团转化为瓜氨酸衍生物，同时释放氨分子；待测抑制剂若结合 PAD4 并抑制酶活性，则脱亚氨反应被阻断，氨生成量下降。 氨特异性荧光生成机制：反应体系中释放的氨，可与试剂盒配套检测试剂发生化学反应，生成具有特征荧光的产物；体系氨含量越高，生成荧光产物越多，检测得到的荧光信号强度越高。 抑制剂活性定量机制：设置无抑制剂酶活最大对照、无酶空白对照，对比加入待测化合物孔位的荧光读值，计算 PAD4 剩余酶活，换算得到化合物抑制率，梯度浓度可拟合得到 IC??，评价小分子抑制效力。 正交筛选验证机制：该氨释放检测属于独立原理的生化体系，可与其他 PAD4 检测方法互为正交验证，有效剔除检测体系带来的假阳性命中化合物，提升筛选结果可靠性。 高通量微板适配机制：整套反应体系经过缓冲液、离子、钙离子浓度优化，适配多孔荧光酶标板，可一次性完成大量候选化合物的初筛与复筛工作。

三、主要应用领域

1、PAD4 小分子抑制剂高通量筛选

候选化合物文库筛选，发现靶向人 PAD4 酶的抑制分子，得到初筛活性命中物。

2、抑制剂效力评价与 IC??测定

对候选小分子、已知 PAD4 工具抑制剂开展体外酶活评价，测定 IC??，对比化合物抑制活性强弱。

3、筛选结果正交验证

作为正交实验，验证其他 PAD4 检测方法得到的阳性化合物，排除假阳性，提高筛选数据可信度。

4、PAD4 酶生化特性研究

研究 pH、钙离子、盐离子等条件对 PAD4 催化活性的影响，开展酶动力学参数测定。

5、表观遗传、NETs 相关药物前期研发

PAD4 参与组蛋白瓜氨酸化、中性粒细胞胞外诱捕网 NETs 形成，试剂盒服务自身免疫、肿瘤相关候选药物前期体外评价。

6、生化方法学开发实训

酶抑制剂高通量筛选方法建立、酶活抑制实验教学实训，板间、孔间重现性良好。

四、使用方法与注意事项

使用方法：试剂盒组分冰上融化；按照实验方案配制缓冲体系，在黑色荧光微孔板中加入待测梯度稀释化合物、PAD4 酶，预孵育；加入 BAEE 底物启动酶促反应；孵育结束后添加检测试剂，充分反应；酶标仪设置激发 405?415?nm、发射 470?480?nm 读取荧光值；设置空白孔、最大酶活对照孔、阳性抑制剂对照孔；计算酶剩余活性，换算抑制率，梯度浓度拟合 IC??。 注意要点：PAD4 酶蛋白对温度敏感，全程冰上操作，避免反复冻融；必须使用黑色不透光荧光酶标板，普通透明板会造成荧光读值偏差；部分待测化合物本身自带荧光，需要设置化合物本底对照扣除干扰；钙离子浓度会显著影响 PAD4 酶活性，严格按照试剂盒说明书配制反应缓冲液；试剂?20℃避光保存，反复冻融会造成 PAD4 酶活下降；仅用于体外生化科研，不能用于临床诊断；实验耗材、废液按照含活性蛋白、小分子抑制剂的生化危废处置；荧光信号本底异常升高、阳性对照抑制剂抑制效果明显偏移，提示试剂失效，不适合筛选定量实验。

五、总结与展望

PAD4 Inhibitor Screening Assay Kit (Ammonia) PAD4 抑制剂筛选检测试剂盒（氨法）凭借氨释放荧光检测原理、与天然底物动力学接近、支持高通量筛选、可做正交验证去除假阳性的核心优势，为 PAD4 靶向小分子的体外酶水平筛选提供标准化工具，可高效评价候选化合物的 PAD4 抑制活性，得到可靠 IC??数据。 PAD4 参与组蛋白瓜氨酸化、NETs 生成，和类风湿关节炎、肿瘤等疾病密切相关；随着表观药物、炎症靶向小分子研发持续推进，该试剂盒可为高校科研院所、创新药物研发企业，提供酶活稳定、质控完备的 PAD4 抑制剂体外筛选科研试剂保障。