在荧光标记与活体成像研究中，ICG NHS ester（吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯）是自带 “近红外 buff” 的标记神器 —— 作为 ICG 的活性衍生物，它的 NHS 酯基团像一把 “分子剪刀”，能精准与生物分子（蛋白、抗体、多肽）的氨基（-NH?）快速反应（37℃下 30 分钟结合率＞90%），形成稳定荧光偶联物。凭借 “近红外发光（780-800nm）、组织穿透深、背景干扰低” 三大核心优势，它成为从 “体外分子标记” 到 “体内活体追踪” 的科研可视化工具，让隐藏的生物过程 “无处遁形”！
核心优势：荧光标记的 “精准与高效”
ICG NHS ester 能成为科研刚需，源于对标记需求的 “量身定制”：
标记反应 “零门槛”：无需复杂催化剂，在中性缓冲液（PBS pH 7.2-8.0）中即可与氨基分子快速偶联，且标记效率不受蛋白分子量影响（无论是 10kDa 多肽还是 150kDa 抗体，标记率均＞85%），新手也能一次成功；
荧光性能 “抗干扰”：近红外波段发光可穿透 5-10mm 组织（可见光仅能穿透＜1mm），在小鼠活体成像中，肿瘤部位荧光信号比可见光染料（如 FITC）强 10 倍，且血液、皮肤的自发荧光干扰降低 90%，信噪比（S/N）≥50:1；
稳定性 “实验友好”：偶联物在 4℃储存 1 个月荧光保留率＞90%，体内循环半衰期＞6 小时（游离 ICG 仅 20 分钟），可满足长时间追踪实验（如细胞迁移、药物递送监测）。
三大核心科研应用场景：从分子到活体全追踪
1. 生物分子标记与体外检测的 “荧光标签”
在分子生物学实验中，它是定位生物分子的 “精准路标”：
蛋白 / 抗体标记：用 ICG NHS ester 标记抗 HER2 抗体（摩尔比 1:5），30 分钟即可完成反应，标记后的抗体仍保持 90% 以上的抗原结合活性（ELISA 验证），可通过荧光显微镜观察其与乳腺癌细胞的特异性结合（荧光共定位率＞95%）；
核酸探针制备：标记氨基修饰的 siRNA，形成荧光 siRNA 探针，转染细胞后可实时追踪其在胞内的分布 ——6 小时观察到 siRNA 从胞吞体进入细胞质，24 小时聚集于细胞核周围，为核酸递送机制提供直观证据。
2. 细胞示踪与迁移研究的 “荧光追踪器”
在细胞生物学研究中，它能让细胞运动 “可视化”：
活细胞标记：用低浓度（5μM）ICG NHS ester 孵育巨噬细胞 30 分钟，可特异性标记细胞膜蛋白（无细胞毒性，存活率＞95%），通过共聚焦显微镜追踪其向炎症部位的迁移，48 小时内仍能清晰观察到荧光信号（未标记细胞无背景）；
细胞移植监测：标记间充质干细胞后注入小鼠损伤模型，通过活体成像系统可观察到细胞在 7 天内从注射部位向损伤组织聚集，荧光强度随修复进程逐渐增强，直接证实干细胞的靶向归巢能力。
3. 活体成像与药物递送的 “导航系统”
在体内研究中，它是评估靶向递送效率的 “金标准”：
肿瘤靶向示踪：将 ICG NHS ester 标记的靶向肽（RGD）偶联到纳米药物上，尾静脉注射后，通过活体成像发现，肿瘤部位荧光信号在 4 小时达峰值（是未靶向纳米粒的 8 倍），且能持续追踪 72 小时，精准评估药物在肿瘤的蓄积与清除；
手术导航辅助：在小鼠肝癌模型中，用 ICG NHS ester 标记的肝癌特异性抗体预处理，术中近红外成像可清晰区分肿瘤组织（强荧光）与正常肝组织（弱荧光），肿瘤切除的准确率提升至 98%（传统肉眼识别仅 75%），为术中精准导航研究提供工具。
实验数据实证：标记效率与荧光性能的 “硬核支撑”
标记效率：HPLC 检测显示，ICG NHS ester 与牛血清白蛋白（BSA）的偶联率达 92%，每分子 BSA 可结合 3-5 个 ICG 分子，无游离染料残留；
活体成像灵敏度：小鼠体内最低可检测到 1×10?个标记细胞，荧光信号与细胞数量呈线性相关（R2=0.99）；
稳定性：标记抗体在 37℃血清中孵育 24 小时，荧光强度下降＜15%，远优于 Cy5.5（下降 40%）。
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